qPCR技術可應用於染色體易位造成的 fusion transcript 的絕對定量，如圖實線是連續10倍稀釋100～109copies的BCR-ABL1 fusion transcript 標準品的擴增曲線，虛線則為 CML病人檢體進行 qPCR後的擴增曲線。此檢體中BCR-ABL1 fusion transcript 的含量為何？

本題觀念：

本題考查 即時定量聚合酶連鎖反應 (Real-time quantitative PCR, qPCR) 的原理及其數據判讀能力，特別是 擴增曲線 (Amplification plot) 與 標準曲線 (Standard curve) 的對應關係。

核心概念如下：

1. Ct值與濃度的關係：Ct值 (Cycle threshold) 與樣本初始模板濃度的對數成 反比 關係。也就是說，樣本濃度越高，擴增曲線越早升起 (Ct值越小/越偏左)；濃度越低，擴增曲線越晚升起 (Ct值越大/越偏右)。
2. 標準品系列稀釋：題目提到標準品進行連續10倍稀釋 (Serial 10-fold dilution)，這意味著每一條相鄰的標準品曲線在 X 軸 (Cycle number) 上大約相差 3.3 個循環 (理論值)。

影像分析：

1. 實線 (標準品)：

   • 圖中有約 8~9 條實線，代表一系列濃度的標準品。
   • 根據 qPCR 原理，最左邊 (最早升起) 的曲線代表最高濃度，最右邊 (最晚升起) 的曲線代表最低濃度。
   • 題目標示範圍為 "$100 \sim 10^9$ copies" (原文 "100～109copies" 應為印刷或 OCR 格式錯誤，實指 $10^2 \sim 10^9$ 或 $10^0 \sim 10^9$)。一般而言，最高濃度通常設為 $10^9$。
   • 讓我們由左至右定義標準品濃度：
     • 第 1 條實線 (最左)：$10^9$ copies
     • 第 2 條實線：$10^8$ copies
     • 第 3 條實線：$10^7$ copies
     • 第 4 條實線：$10^6$ copies
     • ...以此類推至右側低濃度。

2. 虛線 (病人檢體)：

   • 觀察虛線的位置，它位於 第 2 條實線 與 第 3 條實線 之間。
   • 它的起峰點 (Ct值) 比 $10^8$ 的曲線稍晚 (濃度較低)，但比 $10^7$ 的曲線早 (濃度較高)。

選項分析：

• (A) $10^1 \sim 10^2$ copies：這代表極低濃度，擴增曲線應出現在圖形的最右側 (約 Cycle 35-40 之後)。
• (B) $10^2 \sim 10^3$ copies：這屬於低濃度區，曲線應出現在右半部。
• (C) $10^5 \sim 10^6$ copies：這屬於中等濃度，曲線應出現在中間位置 (約第 4~5 條線之間)。
• (D) $10^7 \sim 10^8$ copies：
  • 根據影像分析，病人虛線位於第 2 條實線 ($10^8$) 與第 3 條實線 ($10^7$) 之間。
  • 這表示病人的病毒量 (copy number) 小於 $10^8$ 但大於 $10^7$。
  • 此選項符合影像中的位置。

答案解析：

1. 判斷濃度方向：qPCR 擴增曲線中，越靠左邊 (Ct 值越小) 代表濃度越高。
2. 標定標準品：假設最左邊的第一條標準品曲線為最高濃度 $10^9$ copies，第二條為 $10^8$ copies，第三條為 $10^7$ copies。
3. 定位檢體：病人檢體 (虛線) 的擴增曲線明顯落在第二條 ($10^8$) 與第三條 ($10^7$) 標準品曲線之間。
4. 結論：因此，該檢體中 BCR-ABL1 fusion transcript 的含量介於 $10^7$ 到 $10^8$ copies 之間。

故正確答案為 (D)。

核心知識點：

• qPCR 定量原理：$Ct \propto -\log(\text{Initial Copy Number})$。
• 圖形判讀口訣：「左高右低」。曲線越靠左，濃度越高；曲線越靠右，濃度越低。
• 10倍稀釋差值：在擴增效率 100% 的情況下，濃度差 10 倍，Ct 值約差 3.32 ($2^{3.32} \approx 10$)。

參考資料

1. Real-Time PCR Applications Guide - Bio-Rad
2. The Basics of qPCR - Thermo Fisher