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115年:(醫檢)微生(1)

根據CLSI規範，腦膜炎雙球菌（Neisseria meningitidis ）採用瓊脂稀釋法測定抗生素藥敏試驗時，Müeller-Hinton agar 通常需再額外添加何種物質？

A5％ sheep blood
B5％ lysed horse blood
C2％ NaCl
Dcysteine-free supplements

詳細解析

本題觀念：

本題考點為 CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) 針對特定微生物進行抗生素藥敏試驗 (AST) 時的標準培養基規範。特別針對 腦膜炎雙球菌 (Neisseria meningitidis) 這種較為挑剔 (fastidious) 的細菌，在不同測試方法（瓊脂稀釋法 vs. 肉湯微稀釋法）中所需添加的營養補充物質有所不同。

選項分析：

  • A. 5％ sheep blood (正確)

    • 根據 CLSI M07 (稀釋法標準) 與 M100 (執行標準) 規範，進行 瓊脂稀釋法 (Agar Dilution) 測試 Neisseria meningitidis 時，建議使用 Mueller-Hinton Agar (MHA) 添加 5% 脫纖維綿羊血 (5% defibrinated sheep blood)。
    • 綿羊血能提供 N. meningitidis 生長所需的額外營養，且在瓊脂平盤上能觀察生長情形。這也是紙錠擴散法 (Disk Diffusion) 對於該菌的標準培養基配置。

  • B. 5％ lysed horse blood (錯誤 - 易混淆選項)

    • 此為 肉湯微稀釋法 (Broth Microdilution) 的標準添加物。
    • 在進行肉湯稀釋法時，CLSI 建議使用 Cation-Adjusted Mueller-Hinton Broth (CAMHB) 添加 2.5% ~ 5% 溶解馬血 (LHB, Lysed Horse Blood)。
    • 使用溶解馬血的原因是為了提供生長因子（如 X factor 和 V factor，雖然 N. meningitidis 不像嗜血桿菌絕對需要，但 LHB 可促進生長），且因為紅血球已溶解，肉湯呈現澄清狀，便於判讀細菌生長的混濁度 (Turbidity)。但在瓊脂 (Agar) 方法中，標準是使用綿羊血。

  • C. 2％ NaCl (錯誤)

    • 額外添加 2% NaCl 通常用於檢測 葡萄球菌 (Staphylococcus spp.) 對苯唑西林 (Oxacillin) 或 甲氧西林 (Methicillin) 的抗藥性 (MRSA)，以誘導 PBP2a 的表現或幫助抗藥菌株生長，與腦膜炎雙球菌無關。

  • D. cysteine-free supplements (錯誤)

    • 並非 N. meningitidis 藥敏試驗的標準添加物。某些特殊細菌（如 Legionella）需要 Cysteine，但在本題情境中不適用。

答案解析

根據 CLSI M07 及 M100 規範，針對 腦膜炎雙球菌 (Neisseria meningitidis)：

  • 若採用 瓊脂稀釋法 (Agar Dilution) 或 紙錠擴散法 (Disk Diffusion)：基質為 Mueller-Hinton Agar (MHA)，需額外添加 5% sheep blood (選項 A)。
  • 若採用 肉湯微稀釋法 (Broth Microdilution)：基質為 CAMHB，需額外添加 Lysed Horse Blood (LHB)。

題目明確詢問「瓊脂稀釋法」與「Müeller-Hinton agar」，因此正確答案為 A。

核心知識點

考生應對 CLSI 針對常見苛養菌 (Fastidious Bacteria) 的藥敏試驗培養基條件進行區分記憶：

  1. 腦膜炎雙球菌 (Neisseria meningitidis)：

    • Agar Dilution / Disk Diffusion：MHA + 5% Sheep Blood。
    • Broth Microdilution：CAMHB + LHB (Lysed Horse Blood)。
    • 培養環境：35±2°C, 5% CO2 (此點重要，與一般細菌不同)。

  2. 肺炎鏈球菌 (Streptococcus pneumoniae)：

    • Disk Diffusion：MHA + 5% Sheep Blood。
    • Broth Microdilution：CAMHB + LHB。

  3. 嗜血桿菌屬 (Haemophilus spp.)：

    • 使用 HTM (Haemophilus Test Medium)，內含 MHA + Hematin (X factor) + NAD (V factor) + Yeast extract。

  4. 淋病雙球菌 (Neisseria gonorrhoeae)：

    • 使用 GC Agar base + 1% defined growth supplement。
    • 注意：淋病雙球菌通常不使用 MHA 進行標準藥敏試驗。

參考資料

  1. CLSI M100-Ed34: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. Clinical and Laboratory Standards Institute.
  2. CLSI M07-Ed11: Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically. Clinical and Laboratory Standards Institute.
  3. Jorgensen, J. H., et al. "Multilaboratory evaluation of disk diffusion antimicrobial susceptibility testing of Neisseria meningitidis isolates." Journal of Clinical Microbiology 44.5 (2006): 1744-1754. (Confirming Agar Dilution uses MHA + 5% Sheep Blood).
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