110年:(醫檢)檢驗(2)

下列關於異源雜合雙鏈分析法( Heteroduplex analysis )的敘述,何者錯誤?

A利用溶液雜交( Solution hybridization )
B偵測點突變
C需要與參考( Reference ) DNA 混合加熱
D加熱後要迅速降溫

詳細解析

本題觀念:

異源雜合雙鏈分析法 (Heteroduplex Analysis, HDA) 是一種用於偵測 DNA 序列中突變(如點突變或小片段插入/缺失)的技術。其基本原理是利用野生型(Wild-type)與突變型(Mutant)的 DNA 單鏈在混合退火(Annealing)後,會形成含有錯配鹼基(Mismatch)的異源雙鏈(Heteroduplex)。由於錯配導致的立體構型改變(如形成 Bubble 或 Bulge),使得異源雙鏈在非變性聚丙烯醯胺凝膠(Non-denaturing PAGE)中的電泳移動速度通常比完全互補的同源雙鏈(Homoduplex)慢,藉此分辨出突變的存在。

選項分析

  • A. 利用溶液雜交( Solution hybridization ):正確

    • HDA 的關鍵步驟是將待測 DNA 與參考 DNA(通常是野生型)混合,加熱變性後,在溶液中進行降溫退火。在這個過程中,不同來源的 DNA 單鏈會在溶液中隨機配對雜交,形成同源雙鏈(Homoduplexes)與異源雙鏈(Heteroduplexes)。因此,這是基於溶液雜交原理的技術。
  • B. 偵測點突變:正確

    • HDA 能夠偵測單一鹼基置換(點突變)以及小的插入或缺失。點突變會造成異源雙鏈中出現單一鹼基錯配(Si

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