110年:(醫檢)檢驗(2)
血液腫瘤的染色體轉位( translocation )變異會產生融合基因,下列那一個方法最不適合用來檢測此類的變異?
A染色體核型分析( cytogenetics )
B原位螢光雜交( FISH )
C反轉錄聚合酶連鎖反應( RT-PCR )
DDNA桑格定序法( Sanger sequencing )
詳細解析
本題觀念:
本題核心觀念在於染色體轉位(Translocation)的分子機制以及不同檢測技術的標的與限制。
- 染色體轉位與融合基因:當兩條染色體發生斷裂並交換片段(轉位)時,斷裂點(Breakpoint)通常位於基因的**內含子(Intron)**區域。內含子的長度通常非常長(可達數千至數萬鹼基對),且不同病人的斷裂點位置在內含子中是高度變異的。
- DNA vs. RNA 層次:在轉錄過程中,內含子會被剪接(Splicing)移除,將外顯子(Exon)連接。因此,雖然 DNA 層次的斷裂點位置難以預測,但在成熟 mRNA(以及反轉錄後的 cDNA)層次,融合點通常位於兩個外顯子的接合處,序列相對固定且長度較短。
選項分析
- (A) 染色體核型分析(Cytogenetics / Karyotyping):
- 適合。這是傳統且經典的方法(如檢測 CML 的費城染色體)。它可以直接觀察到染色體的大片段結構變異。雖然解析度較低(通常需 > 5-10 Mb 的變異),但對於大規模的染色體轉位是非常標準的檢測工具。
- (B) 原位螢光雜交(FISH):
- 適合。FISH 使用特定的螢光探針(如融合探針 Fusion probes 或分離探針 Break-apa
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