在以桑格定序法（ Sanger sequencing ）進行體細胞基因突變（ somatic mutation ）分析時，如果待測樣品的異質性（ heterogeneity）很高的時候，下列何者需要謹慎評估？

本題觀念：

本題考查的核心觀念是 桑格定序法（Sanger sequencing）在體細胞突變（Somatic mutation）分析中的偵測極限（Limit of Detection, LOD） 與 數據分析判讀 的限制。

1. 體細胞突變與異質性：與遺傳性（Germline）突變不同（通常為 50% 或 100% 的等位基因頻率），體細胞突變發生在腫瘤組織中。由於腫瘤組織通常具有 高度異質性（Heterogeneity），意即檢體中混雜了正常細胞與腫瘤細胞（Tumor purity 問題），或是腫瘤細胞本身有多個不同基因型的亞克隆（Subclones），導致突變的等位基因頻率（Variant Allele Frequency, VAF）往往很低（可能低於 20% 甚至 5-10%）。
2. 桑格定序的限制：傳統桑格定序被視為黃金標準，但其對低頻率突變的靈敏度有限。一般來說，突變比例需達到 15% ~ 20% 以上，才能在定序圖譜（Electropherogram）中形成肉眼或軟體可明確判讀的次要波峰（Minor peak）。
3. 訊號與雜訊：當異質性很高（突變比例很低）時，突變點的訊號波峰會非常微弱，高度可能接近背景雜訊（Background noise）。此時，如何設定 **訊號基準線（Baseline

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