關於次世代定序（ Next-generation sequencing, NGS ）技術，下列敘述何者錯誤？

本題觀念：

本題考查次世代定序（Next-generation sequencing, NGS）技術的原理與侷限性，題目為反向題（問「何者錯誤」）。

選項分析

(A) 將欲定序的 DNA 片段化（fragmentation）才能進行後續實驗 ✅（正確陳述）

NGS 的文庫製備（library preparation）第一步就是將高分子量的基因組 DNA 打斷成適當大小的片段（通常 150–300 bp 的插入片段，依平台而異）。片段化方法包括：

• 物理法：超音波打斷（sonication, e.g., Covaris）
• 酶解法：核酸酶（DNase I）、Tn5 轉座酶（Nextera 法）

片段化是 NGS 文庫製備的必要步驟。

(B) DNA 必須接上轉接引子（adaptor primer）才能進行定序 ✅（正確陳述）

片段化後，每段 DNA 兩端需接上接頭（adapter），接頭的功能包括：

• 提供 flow cell 表面的寡核苷酸互補序列，使 DNA 片段能固定（bridge amplification 或 clustering）
• 提供定序引子（sequencing primer）的結合位點
• 含有索引序列（index/barcode），用於多樣本（multiplexing）區分

**(C)

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