關於實驗室內部開發檢測及區分登革熱（ DENV ）、曲弓熱（ CHIKV ）和茲卡病毒（ ZIKV ）之 trioplex real-time reverse transcription (RT)-PCR 試劑的敘述，下列何者錯誤？

本題觀念：

本題考查 CDC 開發的 Trioplex real-time reverse transcription PCR（RT-PCR）試劑之設計細節，包括反應格式（one-step vs. two-step）、探針設計、以及各類對照組的用途。本題為反向題（問「何者錯誤」）。

選項分析

(A) 使用 one step RT-PCR 反應，較省時 ✅ 正確陳述 CDC Trioplex RT-PCR 設計為 one-step（一步法）反應，即反轉錄（RT）與 PCR 增幅（PCR amplification）在同一反應管、同一個熱循環程序中完成。相較於 two-step RT-PCR（先 RT 後另開一管 PCR），one-step 法省去分管步驟，操作更簡便且耗時較短，並降低汙染風險。

(B) 使用 1條黃病毒屬特異性螢光團標記的探針 ❌ 錯誤陳述（本題答案） Trioplex RT-PCR 採用病毒特異性（virus-specific）探針，而非黃病毒屬（Flavivirus）通屬性探針。每種病毒各有獨立一組引子（primers）＋ TaqMan® 水解探針（hydrolysis probe），並以不同螢光染料標記以便多重偵測（multiplexing）：

• 登革熱病毒（DENV）：FAM 染料（5'

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