109年:(醫檢)檢驗(1)
下列何種分子檢測法不適用於檢測細菌的抗藥性基因?
AArbitrarily primed PCR
BPyrosequencing
CPCR -SSCP (single-strand conformation polymorphism)
DMicroarray analysis
詳細解析
本題觀念:
分子偵測方法的應用範圍 — 細菌抗藥性基因(antimicrobial resistance gene)偵測的適用方法
抗藥性基因偵測需要針對已知的特定基因序列進行精準偵測,因此適用的方法必須具備序列特異性(sequence-specific)或足夠解析力以辨識基因序列差異。本題考查哪一種方法不適用於此目的。
選項分析
(A) Arbitrarily primed PCR(AP-PCR,任意引子 PCR)✅ 正確答案(不適用) AP-PCR(即 RAPD)的設計原理是使用隨機序列的任意引子,在低嚴謹度(low stringency)退火條件下,對全基因體進行非特異性擴增,產生隨機的 DNA 指紋圖譜(fingerprint)。
其本質是基因分型(genotyping)/ 菌株分型工具,目的是比較菌株間的遺傳相似性,不能針對特定基因序列進行偵測。由於引子沒有序列特異性,無法確認所擴增的片段是否真的是抗藥性基因,更無法識別特定突變位點。因此,AP-PCR 不適合用於偵測細菌的抗藥性基因。
(B) Pyrosequencing(焦磷酸定序) Pyrosequencing 是一種「邊合成邊定序」的即時定序技術,透過偵測 DNA 合成過程中釋放的焦磷酸(pyrophosphate)訊號判讀序列。可精
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