109年:(醫檢)檢驗(1)

變性高效能液相層析法能有效檢測因核 苷酸單點突變造成的遺傳疾病,例如海洋性貧血。對於此方法的相關敘述,下列何者正確?

A此檢測方法不需要進行聚合 酶連鎖反應放大欲檢測的基因片段
B其原理是雙股 DNA (duplex DNA )片段長度與層析管柱的親和力成正比
C雙股 DNA 中若有錯配的核 苷酸,會降低其與層析管柱的親和力
D進行變性高效能液相層析法時,層析管柱的 溫度須保持恆定

詳細解析

本題觀念:

變性高效能液相層析法(denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC)的原理與應用

選項分析

(A) 此檢測方法不需要進行聚合酶連鎖反應放大欲檢測的基因片段 ❌(錯誤陳述,非答案) DHPLC 分析必須先以 PCR 擴增目標基因片段,再將 PCR 產物進行變性-複性處理以形成異源雙股 DNA(heteroduplex),方可進行層析分析。沒有 PCR 放大步驟,無法獲得足夠量的分析樣本。

(B) 其原理是雙股 DNA(duplex DNA)片段長度與層析管柱的親和力成正比 ❌(錯誤陳述,非答案) DHPLC 的分離原理並非單純以 DNA 片段長度決定層析管柱親和力。DHPLC 的層析管柱(ion-pair reversed-phase HPLC column)在部分變性(partial denaturation)溫度條件下,以鹼基序列組成(尤其是序列錯配)決定 DNA 與固定相的親和力。具有錯配(mismatch)的異源雙股 DNA 熔解溫度較低,在固定溫度下更易部分解鏈,與管柱親和力下降,因此保留時間縮短,可與同源雙股 DNA(homoduplex)分離。此選項描述的長度-親和力關係並不正確。

(C) 雙股 DNA 中若有錯配的核苷

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