108年:(醫檢)檢驗(2)
承上題【關於應用核酸序列的即時放大反應( Real-time nucleic acid sequence-based amplification ,Real-time NASBA )檢測腦脊液中腸病毒的敘述,下列何者最不適當?】,下列何者不是添加內部校正子( internal calibrator )RNA 至檢體中,再進行核酸抽取及擴增的目的?
A檢測核酸萃取是否成功
B檢測腸病毒特異性探針的專一性
C檢測核酸擴增是否成功
D輔助定量病毒核酸
詳細解析
本題觀念:
本題承接上題,考核添加內部校正子(internal calibrator)RNA 至腸病毒腦脊液檢體後再進行核酸抽取及 Real-time NASBA 擴增的目的,為反向題(不是...目的),需找出不符合內部校正子用途的選項。
選項分析
(A) ✅ 檢測核酸萃取是否成功 內部校正子 RNA 在核酸抽取前即加入檢體中,與目標 RNA 一起經歷整個萃取流程。若抽取過程失敗(如蛋白質沉澱破壞核酸),校正子 RNA 也會隨之消失,Real-time NASBA 則偵測不到校正子訊號,由此判斷萃取失敗。此為內部校正子的重要目的之一,選項陳述正確(是目的)。
(B) ❌ 檢測腸病毒特異性探針的專一性(本題答案) 此選項不是添加內部校正子的目的。驗證「探針(probe)的專一性(specificity)」是在**方法開發(assay development)和驗證(validation)**階段完成的工作,使用的是已知的陽性/陰性參考物質,而非加入檢體的內部校正子 RNA。
內部校正子 RNA 是一段與目標 RNA(腸病毒 RNA)序列不同但能被同組引子擴增的 RNA 分子,它有自己專屬的偵測探針(與腸病毒探針不同)。因此校正子訊號是監控萃取效率和擴增效率的工具,**無法用
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