108年:(醫檢)檢驗(1)

關於 heteroduplex migration analysis 之敘述,下列何者正確?

ASample 需經 restriction enzyme digestion
BSample 需經 denaturation 、renaturation 等步驟
CSample 需經 probe hybridization
D⽤於偵測 SNP 時,其片段⼤⼩不能⼤於 300 bp

詳細解析

本題觀念:

異型雙股體遷移分析(heteroduplex migration analysis, HMA)是一種利用 DNA 構形差異(因序列不符產生的 bulge 或 bubble)偵測突變的電泳技術。正確敘述是 sample 需要經過變性(denaturation)和再退火(renaturation)步驟。

選項分析

(A) Sample 需經 restriction enzyme digestion — 錯誤。限制酶消化是 RFLP(restriction fragment length polymorphism)的必要步驟,HMA 本身不需要切割 DNA,它直接針對 PCR 產物進行後續處理。

(B) Sample 需經 denaturation、renaturation 等步驟 — 正確。HMA 的核心步驟就是先將 PCR 產物(雙股 DNA)加熱變性分開為單股,再緩慢冷卻使其重新退火(renaturation)。若樣本中存在突變(如 SNP、小片段插入/缺失),重新退火時野生型與突變型單股可能彼此配對,形成含有錯誤配對或突起的異型雙股體(heteroduplex),其在聚丙烯醯胺凝膠電泳中的遷移速率比完美配對的同型雙股體(homoduplex)慢,從而被偵測出來。

**(C) Sample 需經 probe hybridizati

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