108年:(醫檢)檢驗(1)

單股結構多型性( Single-strand conformation polymorphism, SSCP )需要進⾏下列何種電泳?

A非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳( Non-denatured PAGE )
B變性聚丙烯醯胺凝膠電泳( Denatured PAGE )
C非變性瓊脂膠體電泳( Non-denatured agarose gel electrophoresis )
D變性瓊脂膠體電泳( Denatured agarose gel electrophoresis )

詳細解析

本題觀念:

單股結構多型性(Single-strand conformation polymorphism, SSCP)是利用單股 DNA 在特定序列下形成特定二級構形(intrastrand base pairing),並利用電泳偵測因序列差異(如 SNP)所導致的構形改變,進而辨別突變的技術。其必須使用非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(Non-denaturing PAGE)

選項分析

(A) 非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(Non-denatured PAGE) — 正確。SSCP 分析的基本前提是讓單股 DNA 依其序列形成穩定的三維構形(secondary structure),若使用變性條件(如尿素或甲醯胺),則所有單股 DNA 將被完全展開,失去構形差異,無法區分突變與正常序列。因此必須在非變性條件下進行電泳,使不同構形的單股 DNA 遷移速率不同而分離。

(B) 變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(Denatured PAGE) — 錯誤。變性凝膠(含尿素)會破壞單股 DNA 的二級結構,使所有片段僅依大小分離,無法反映序列差異引起的構形改變,喪失 SSCP 的偵測能力。

(C) 非變性瓊脂膠體電泳(Non-denatured agarose gel electrophoresis) — 錯誤。瓊脂糖凝膠(agarose gel)的孔

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