甲基化的 DNA 序列 5'-ATCTAA mCG-3' 經bisulfite 處理，PCR 增幅，由pyrosequencing 所得結果為何？

本題觀念：

本題考核 bisulfite 定序法偵測 DNA 甲基化的原理，以及 pyrosequencing 最終讀取結果。

選項分析

題目解讀：原始序列為 5'-ATCTAA mCG-3'，其中 mC 代表甲基化胞嘧啶（5-methylcytosine, 5mC）。
Bisulfite 處理 → PCR 增幅 → pyrosequencing 的步驟如下：

Bisulfite 處理原則（對單股 DNA）：

• 未甲基化的 Cytosine（C） → 轉化為 Uracil（U）→ PCR 時讀為 Thymine（T）
• 甲基化的 Cytosine（mC） → 不受 bisulfite 影響，維持為 Cytosine（C）

逐字分析原始序列 5'-ATCTAA mCG-3'：

• A → A（不變）
• T → T（不變）
• C → U（bisulfite 轉化） → PCR 讀為 T
• T → T
• A → A
• A → A
• mC → mC 不被轉化 → PCR 讀為 C
• G → G（不變）

轉化後 PCR 結果：5'-ATTTAACG-3'

(A) 5'-ATCTAATG-3'：第3位 C 未轉化（應為 T），且第7位 mC 被錯誤轉化為 T

...（解析預覽）...