以呈色法（chromogenic assay）檢測第八凝血因子活性的試劑，不包括下列何者？

本題觀念

呈色法（chromogenic assay）是檢測第八凝血因子（factor VIII）活性的重要方法，特別適合用來評估經過基因重組或修飾的factor VIII製劑活性。這個檢驗採用兩階段（two-stage）設計：第一階段先在試管中重建體內的intrinsic tenase複合體，模擬factor VIII作為輔因子活化factor X的生理反應；第二階段再用呈色受質偵測第一階段所產生的factor Xa量，藉此反推檢體中factor VIII的活性高低。掌握這兩個階段各自需要哪些試劑，是回答本題的關鍵。

選項分析

• A ❌ factor IXa是呈色法試劑組成的一部分。第一階段的intrinsic tenase複合體正是由factor VIIIa與factor IXa共同組成，兩者搭配磷脂質與鈣離子，負責把factor X活化成factor Xa，因此factor IXa是必要試劑，不是本題答案。
• B ❌ factor X同樣是呈色法試劑組成的一部分。factor X在第一階段扮演受質角色，被intrinsic tenase複合體活化成factor Xa，第二階段呈色受質偵測的正是這個factor Xa的量，因此factor X也是必要試劑，不是本題答案。
• C ❌ thrombin（或prothrombin）也是呈色法試劑組成的一部分。thrombin的功能是在第一階段先把檢體中的factor VIII活化為具功能的factor VIIIa，才能進一步組成intrinsic tenase複合體，因此thrombin是反應必要的活化試劑，不是本題答案。
• D ✅ factor Va並不包含在呈色法試劑組成中，這是正確敘述，也是本題答案。factor Va是prothrombinase複合體（由factor Xa、factor Va、磷脂質與鈣離子組成）的成員，功能是把prothrombin活化為thrombin，屬於凝血共同路徑下游的反應，與第八凝血因子呈色法所模擬的intrinsic tenase複合體是完全不同的酵素系統，因此市售呈色法試劑套組中不會加入factor Va。

答案解析

本題答案為D。題目問的是呈色法試劑「不包括」哪一項，A的factor IXa、B的factor X與C的thrombin分別對應第一階段反應中三個不可或缺的角色：thrombin負責活化檢體中的factor VIII，factor IXa與活化後的factor VIII共同組成intrinsic tenase複合體，factor X則是被這個複合體活化的受質，三者都是呈色法試劑必須包含的成分。D的factor Va屬於另一個獨立的酵素複合體，也就是負責把prothrombin轉為thrombin的prothrombinase複合體的組成因子，這個反應發生在凝血共同路徑下游，與factor VIII所參與的intrinsic tenase複合體屬於不同層次、不同任務的反應系統，因此factor VIII呈色法試劑組成中並不需要、也不會包含factor Va，故D為本題答案。

核心知識點

• factor VIII呈色法是兩階段設計：第一階段重建intrinsic tenase複合體活化factor X，第二階段以呈色受質偵測factor Xa量
• 第一階段試劑組成包括thrombin（活化檢體中的factor VIII）、factor IXa、factor X（受質）、磷脂質與鈣離子
• factor Va屬於prothrombinase複合體（factor Xa、factor Va、磷脂質、鈣離子）成員，功能是活化prothrombin為thrombin
• intrinsic tenase複合體與prothrombinase複合體是凝血路徑中兩個不同層次的酵素系統，前者與factor VIII呈色法有關，後者與factor VIII呈色法試劑組成無關
• 市售factor VIII呈色法套組明確列出試劑為thrombin、factor IXa、factor X、磷脂質與呈色受質，不含factor Va

參考資料

• 呈色法凝血因子檢測對血友病診斷與治療影響回顧文獻 - Mayo Clinic Labs
• 呈色法與一階段法凝血因子活性檢測比較文獻 - American Journal of Hematology
• 第八凝血因子兩階段呈色法檢測試劑技術說明 - Synnovis
• 第八凝血因子呈色法檢測套組技術文件 - Sysmex