115年:(醫檢)免疫病毒(2)

有關以混合細胞(R-mix)培養病毒及鑑定方法之敘述,下列何者錯誤?

A混合細胞是由Mink lung(Mv1Lu)及A549 細胞所組成
B可偵測RSV、influenza A、parainfluenza、adenovirus 等呼吸道病毒
C培養24 小時後,最常利用RT-PCR 方法檢測
D病毒量高時在此培養系統可觀察到細胞病變(cytopathic effect)

詳細解析

本題觀念:

R-Mix 是把 Mink lung 細胞株 Mv1Lu 與人類 A549 細胞組成混合單層培養,用來增加呼吸道病毒分離與快速鑑定的涵蓋範圍。判斷本題時,要同時核對混合細胞的組成、可偵測的病毒種類、培養後的判讀方式,以及病毒造成細胞病變的可能性。題目問的是錯誤敘述,因此關鍵在於分清楚「培養系統的快速鑑定方法」與「分子檢測方法」並不是同一件事。

選項分析

A 正確。 R-Mix 的名稱反映其混合細胞設計,細胞單層由 Mink lung 的 Mv1Lu 細胞與人類肺腺癌來源的 A549 細胞共同構成。兩種細胞對不同呼吸道病毒的感受性與支持能力有所差異,放在同一個培養系統中,可以在一個檢體處理流程裡涵蓋較多病毒。這不是把兩種病毒混合,而是把兩種宿主細胞混合培養;理解這個層次,就不會把 R-Mix 誤認成單一細胞株。

B 正確。 R-Mix 的用途是快速偵測多種呼吸道病毒,文獻所列的對象包括呼吸道融合病毒(respiratory syncytial virus, RSV)、A 型流感病毒、副流感病毒,以及腺病毒等。這些病毒在細胞嗜性、複製效率與細胞病變表現上並不完全相同,混合細胞單層可提高培養系統對不同病毒的實用性。選項用「可偵測」描述範圍,並沒有表示每種病毒都一定產生相同程度的病變或具有完全相同的檢出率,因此敘述符合 R-Mix 的定位。

C 錯誤。 R-Mix 培養約 20~24 小時後,常見的快速判讀方式是利用病毒特異性的單株抗體進行免疫螢光染色,直接在細胞中確認病毒抗原。RT-PCR 是偵測病毒核酸的分子方法,臨床檢驗確實可能使用,但它不是 R-Mix 細胞培養在 24 小時後最典型的培養系統判讀方法。若把「培養後以抗體染色辨識病毒」改寫成「最常利用 RT-PCR 檢測」,就把細胞培養搭配的快速免疫染色流程,和不依賴病毒在細胞中增殖的核酸檢測流程混為一談。

D 正確。 R-Mix 是活細胞培養系統,病毒感染與複製如果達到足夠程度,可能造成細胞形態、排列或完整性的改變,也就是細胞病變(cytopathic effect, CPE)。病毒量較高時,受感染細胞較多,觀察到 CPE 的機會也會增加。不過,沒有明顯 CPE 不能排除感染,因為不同病毒的細胞病變速度與程度不同;因此實驗室仍可依免疫螢光染色等方法做快速確認。

答案解析

本題答案為 C。R-Mix 的核心是以 Mv1Lu 與 A549 混合單層支持多種呼吸道病毒的培養,培養後可觀察 CPE,並在短時間內以病毒特異性單株抗體進行免疫螢光染色來確認病毒。RT-PCR 雖然是重要的病毒核酸檢測工具,但題目所說的 R-Mix 培養 24 小時後之快速鑑定,主要概念是培養結合免疫螢光抗原檢測,而非把 RT-PCR 當作該培養系統的標準讀值。

核心知識點

  1. R-Mix 是混合細胞培養系統,組成為 Mink lung 的 Mv1Lu 與人類 A549 細胞。
  2. 它可用於多種呼吸道病毒的快速偵測,包括 RSV、A 型流感病毒、副流感病毒與腺病毒。
  3. 培養法的判讀可包含 CPE 觀察;快速確認則常以病毒特異性單株抗體免疫螢光染色辨識細胞內抗原。
  4. RT-PCR 屬於核酸擴增檢測,和細胞培養後的免疫螢光判讀在原理、檢測標的與操作流程上不同。考題若把兩者互換,應先回到「檢測的是病毒抗原、細胞病變,還是核酸」來判斷。

參考資料

  1. R-Mix cell culture evaluation
  2. Rapid detection of respiratory viruses with mixed cell culture
  3. Immunofluorescent identification in R-Mix culture
  4. Respiratory virus cytopathic effect and culture findings
  5. Cell culture overview