114年:(醫檢)檢驗(1)
目前核酸萃取方式有許多種,包括管柱萃取純化法(column purification)、有機溶劑萃取純化法及磁珠萃取純化法等,下列敘述何者最不適當?
A管柱萃取純化法具有操作簡單、回收率高及性能穩定的特點
B有機溶劑萃取純化法主要以陰離子界面活性劑(SDS)將細胞打破後,進行DNA純化
C磁珠萃取純化法是利用pH值及離子強度(strength)的不同,調控磁珠與核酸之間的吸附能力,進 行DNA純化
D有機溶劑萃取純化法比較耗時、無法萃取完全、產量低
詳細解析
本題觀念:
探討主流核酸萃取方法──管柱(spin column)法、有機溶劑(phenol–chloroform)萃取法、磁珠(magnetic beads)萃取法──之原理與優缺點。重點在於各技術如何裂解細胞、選擇性結合與洗脫DNA,以及時間、安全性、回收率等性能比較。
選項分析
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選項A
管柱萃取法利用高鹽條件下DNA對矽膠膜的強力吸附,再經由低鹽或水洗脫,以獲得高純度DNA。操作步驟固定、無需危險化學品,30分鐘以內即可完成,且回收率常達90%以上,結果重現性佳、性能穩定 (thermofisher.cn)。 -
選項B
敘述「有機溶劑萃取法主要以陰離子界面活性劑(SDS)將細胞打破後進行DNA純化」不妥。SDS確實是常見於裂解緩衝液中的陰離子界面活性劑,用以破壞細胞膜、變性蛋白,但它並非「有機溶劑萃取」的核心試劑。有機法主要倚賴phenol與chloroform透過相分離去除蛋白質與脂質,再以酒精沉澱DNA ([thermofisher.cn](https://www.th
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