原位螢光雜交法（ FISH）是利用螢光探針偵測細胞內特定之 DNA序列，下列敘述何者最不適當？

本題觀念：

本題探討 FISH（Fluorescence In Situ Hybridization）技術中 interphase 與 metaphase 的使用差異，包含探針大小、探針種類（locus‐specific probe、whole chromosome paint probe）及細胞週期處理方式（colcemid arrest）等技術要點。

選項分析

• 選項A
  「進行 interphase FISH 時，所使用的 probe 長度建議為 60～200 kb」
  interphase FISH 為了在非分裂期細胞核中得到足夠的螢光訊號，locus‐specific probes（LSI probes）通常需至少 20 kb，且大多介於 100～300 kb 之間，最常見約 100～200 kb 範圍內。60～200 kb 屬於可接受範圍，符合臨床常用 interphase FISH 探針長度建議(basicmedicalkey.com)。

• 選項B
  「使用全染色體探針時，建議進行 interphase FISH」
  Whole chromosome paint (WCP) 探針涵蓋整個染色體的大量 DNA，於 interphase 細胞核中訊號會過度擴散成模糊光暈，不易解讀；WCP 主要在 metaphase 染色體攤展時使用，用於檢測染色體重排或異常。因此並不建議用於 interphase FISH，此敘述最不適當(basicmedicalkey.com)。

• 選項C
  「偵測 translocation 時，可設計兩條 probes 進行檢測」
  偵測基因重排常用 dual‐fusion probes 或 break‐apart probes，均需兩條標記不同螢光色素的探針，分別標定斷點兩側序列；異常時訊號重疊或分離，即可判斷 translocation 是否存在。此設計原理正確(pathsocjournals.onlinelibrary.wiley.com)。

• 選項D
  「進行 metaphase FISH 時，需加入 colcemides，使細胞停在 metaphase」
  metaphase FISH 必須在細胞分裂中期攤展染色體，實驗中常以 colchicine 或 colcemid 干擾微管聚合，阻斷細胞由 metaphase 往 anaphase，增加 metaphase 細胞比例及攤展品質。此步驟為標準操作(karyotypinghub.com)。

答案解析

只有選項B 與實際常規不符：WCP 探針在 interphase 細胞中訊號過度擴散，無法準確計數，故只用於 metaphase FISH。其餘選項皆符合 interphase/metaphase FISH 探針設計及操作要求。

核心知識點

• FISH 探針基本分類：
  • CEP (Centromere Enumerating Probes)
  • LSI (Locus‐Specific Identifier) probes：20 kb 以上，常見 100–200 kb
  • WCP (Whole Chromosome Paint) probes：整染色體，適用 metaphase
• Interphase FISH 與 metaphase FISH 差異：
  • Interphase：無需細胞週期同步化、用於快速檢測常見染色體異常（增、減、微缺失、轉位）
  • Metaphase：需 colcemid/colchicine arrest，適用全染色體重排與 karyotype 分析
• Translocation 偵測策略：
  • Dual‐fusion probe：偵測特定融合事件
  • Break‐apart probe：偵測任意 partner 的基因斷裂
• 細胞週期抑制劑：colcemid/colchicine 抑制微管，維持 cells 在 metaphase，提升 metaphase FISH 成功率

臨床重要性

熟悉 interphase 與 metaphase FISH 技術細節，可在臨床病理與分子診斷中快速判讀染色體異常，提升癌症、遺傳疾病等檢測效率與準確度。