113年:(醫檢)檢驗(1)
下列那種甲基化分析方法的靈敏度最低?
A甲基化專一性PCR反應
B以南方墨點法分析經同型異質鑑識酶(isoschizomer)切割後的片段
C重亞硫酸鹽定序法
DMethyLight分析
詳細解析
本題觀念:
DNA甲基化定量分析技術的靈敏度比較。不同方法對低豐度甲基化訊號偵測能力不同,臨床與研究上選擇適當技術需考慮其檢出極限。
選項分析
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選項A 甲基化專一性PCR(MSP)
MSP是經典的定性方法,設計專一於甲基化/非甲基化序列玻璃酸(bisulfite)處理後的差異。文獻指出MSP可在1‰左右的比例偵測到甲基化等位基因(約0.1%)(journals.sagepub.com)。 -
選項B 以南方墨點法分析經同型異質鑑識酶切割後的片段(Methylation‐sensitive Southern blot)
Southern blot需大量基因組DNA(通常數十微克),且僅能分析酶切位點附近甲基化,對低豐度(<10%)或微量馬賽克甲基化事件幾乎偵測不到。研究顯示Southern blot對裂變類似Fragile X的甲基化馬賽克,低於數%(甚至<1%)皆無法檢出,靈敏度遠低於PCR-based方法(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。 -
選項C 重亞
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