112年:(醫檢)檢驗(2)
關於 Sanger sequencing 的敘述，下列何者最不適當？
A原理是雙去氧核苷酸鏈中止法（ dideoxynucleotide chain termination ）
B所使用的核苷酸包括雙去氧核苷酸與去氧核苷酸
C可以用四種螢光分別標定不同的雙去氧核苷酸
D定序引子應設計在變異點前 5 bp 左右，以利判讀
詳細解析
本題觀念
聚焦在 Sanger 定序法（dideoxy chain termination）的技術原理與定序引子（primer）設計的原則。
選項分析
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選項A
Sanger 定序的核心原理即是利用 dideoxynucleotide（ddNTP）造成 DNA 鏈終止（chain termination），故此敘述正確。ddNTP 缺少 3′-OH，加入後無法再形成磷酸二酯鍵，恰好終止鏈延伸(en.wikipedia.org)。 -
選項B
傳統的 Sanger 定序混合了四種正常去氧核苷酸（dNTP）和少量的四種雙去氧核苷酸（ddNTP），以產生不同長度的終止片段，故此敘述正確(scientificlib.com)。 -
選項C
現今自動化的 Sanger 定序常用四種不同螢光標記分別標示 ddATP、ddTTP、ddCTP、ddGTP，並以毛細管電泳分辨，故此敘述正確([aatbio.c
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