107年:營養生理生化(2)
在進行蛋白質定序時,若使用到 dithiothreitol ,則其目的是下列何者?
A用以破壞蛋白質之雙硫鍵
B用以破壞蛋白質之氫鍵
C用以破壞蛋白質之親水性交互作用
D用以破壞蛋白質之疏水性交互作用
詳細解析
本題觀念:
蛋白質變性與雙硫鍵還原 (Protein Denaturation and Disulfide Bond Reduction)
本題主要測驗考生對於蛋白質化學分析中常用試劑及其作用機制的理解。Dithiothreitol (DTT),又稱為 Cleland's reagent,是一種強還原劑 (Reducing agent),在蛋白質定序、SDS-PAGE 電泳及蛋白質純化過程中,扮演破壞蛋白質三級與四級結構的關鍵角色。
選項分析
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A. 用以破壞蛋白質之雙硫鍵 (Correct)
- 機制:DTT 的化學結構中含有兩個硫醇基 (-SH)。它能透過氧化還原反應,將蛋白質分子內或分子間的雙硫鍵 (Disulfide bonds, S-S) 還原成兩個游離的硫氫基 (Sulfhydryl groups, -SH)。
- 定序中的作用:在蛋白質定序(如 Edman 降解法或質譜分析)前,必須先將蛋白質的立體結構解開(變性),使其成為線性的多肽鏈。雙硫鍵是共價鍵,相當堅固,無法單純用加熱或變性劑破壞,因此必須使用 DTT 或 -巰基乙醇 (-mercaptoethanol) 這類還原劑來切斷它,確保定序試劑能順利作用於所有胺基酸序列。
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**B. 用以
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