115年:(醫檢)檢驗(2)

有關Kinyoun 染色法檢查痰液結核分枝桿菌的敘述,下列何者正確?

A染色時需要加熱抹片
B結核分枝桿菌染色後為藍色
C以油鏡觀察判讀
D靈敏度大於Auramine-Rhodamine 染色法,更容易判讀

詳細解析

本題觀念

Kinyoun染色法是抗酸性染色(acid-fast stain)的一種,用於檢查痰液檢體中的結核分枝桿菌,其原理與操作方式和另一種常見的Ziehl-Neelsen法有關鍵差異。掌握Kinyoun法在染色步驟、呈色結果與顯微鏡判讀方式上的特性,才能正確分辨此染色法與其他抗酸染色技術(包括螢光染色法Auramine-Rhodamine)之間的異同,這正是本題考核的重點。

選項分析

A:Kinyoun染色法是抗酸性染色的「冷染法」,其特色即是使用高濃度carbol fuchsin(酚與鹼性復紅)取代加熱步驟,藉由提高染劑濃度讓染料滲透進入分枝桿菌厚實的細胞壁,因此染色時並不需要加熱抹片;這一點與需要加熱固定染劑的Ziehl-Neelsen法明顯不同,此敘述不正確。

B:具抗酸性的結核分枝桿菌,經carbol fuchsin初染並以酸酒精脫色後仍會保留紅色(呈亮紅色或紫紅色),而非抗酸性的背景成分才會在methylene blue複染後呈現藍色;因此結核分枝桿菌染色後應為紅色而非藍色,此敘述不正確。

C:依標準實驗室協定,Kinyoun抹片的顯微鏡判讀程序是先以低倍鏡觀察抹片整體品質,再改用100倍物鏡並沾浸鏡油,以油鏡逐一觀察與計數視野中呈紅色的抗酸桿菌;這是carbol fuchsin類染色法(含Kinyoun)判讀的標準做法,敘述正確,為本題答案。

D:與Kinyoun法相對的螢光染色法Auramine-Rhodamine,是利用螢光顯微鏡於較低倍率下判讀,不需油鏡;多篇比較研究更指出,對結核分枝桿菌複合群而言,Auramine-Rhodamine的偵測靈敏度有優於或至少相當於Kinyoun等carbol fuchsin類染色的趨勢,並非Kinyoun靈敏度較高、更容易判讀,此敘述不正確。

答案解析

本題答案為C。Kinyoun法屬於免加熱的carbol fuchsin抗酸染色,是Ziehl-Neelsen法之外另一種常用的痰液結核分枝桿菌染色方式,兩者最大差異在於Kinyoun法以高濃度染劑取代加熱步驟。染色完成後,具抗酸性的分枝桿菌呈紅色,非抗酸性背景經複染呈藍色。無論何種carbol fuchsin類抗酸染色,其抹片判讀方式都仍依循傳統亮視野顯微鏡的油鏡觀察,需以100倍物鏡沾浸鏡油逐一計數視野中的抗酸桿菌,這與可用較低倍率判讀、靈敏度可能更高的螢光染色法Auramine-Rhodamine形成鮮明對比,也是操作上必須熟記的判讀差異。

核心知識點

準備抗酸染色相關考題時,建議把幾種染色法的關鍵差異整理清楚:Ziehl-Neelsen法需加熱固定染劑;Kinyoun法是免加熱的冷染carbol fuchsin法;兩者染色結果皆須以油鏡(100倍物鏡沾浸鏡油)判讀,抗酸桿菌呈紅色。相對地,螢光染色法Auramine-Rhodamine不需油鏡、可用較低倍率快速篩檢,且對結核分枝桿菌複合群的偵測靈敏度往往更高。這些染色原理與判讀方式的對照,是醫事檢驗師執行痰液結核分枝桿菌鏡檢時的核心操作知識。

參考資料

  1. Wikipedia: Kinyoun stain. https://en.wikipedia.org/wiki/Kinyoun_stain
  2. Microbe Notes: Acid Fast Stain (Kinyoun-Cold Method). https://microbenotes.com/acid-fast-stain-kinyoun-cold-method-principle-procedure-and-result-interpretation/
  3. American Society for Microbiology: Acid-Fast Stain Protocols. https://asm.org/asm/media/protocol-images/acid-fast-stain-protocols.pdf
  4. Microbiology Spectrum: Comparison of diagnostic accuracy and sensitivity of Kinyoun and auramine-rhodamine stains. https://journals.asm.org/doi/10.1128/spectrum.00475-26
  5. ScienceDirect Topics: Carbol Fuchsin. https://www.sciencedirect.com/topics/immunology-and-microbiology/carbol-fuchsin