114年:(醫檢)檢驗(1)
以增幅阻礙突變系統(amplification refractory mutation system, ARMS)檢測微量的突變,下列敘述何者最正確?
A使用肽核酸(peptide nucleic acid, PNA)抑制野生型的PCR
B使用限制酶切斷野生型模板
C以螢光探針與突變位置雜合
D以突變專一引子進行PCR
詳細解析
本題觀念:
Amplification Refractory Mutation System(ARMS)又稱為 allele-specific PCR,核心在於設計一對特異性引子,使引子的 3′ 末端緊貼突變位點,只有在與樣本序列完全互補(即帶有突變序列)時才能有效延伸擴增,對野生型序列呈「阻斷(refractory)」;因此能在大量野生型背景中,靈敏檢測低頻率的突變等位基因(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。
選項分析
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選項A 使用 PNA 抑制野生型的 PCR
PNA-clamping PCR 利用 peptide nucleic acid(PNA)與野生型序列高親和力結合,阻礙 DNA 聚合酶延伸,從而選擇性放大突變序列。此法稱為 PNA-clamp,靈敏度可達 0.1% 以下,但它不屬於 ARMS 原理,而是 PNA 阻斷技術(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。 -
選項B 使用限制酶切斷野生型模板
PCR-RFLP(restriction
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