有關造成直接抗人類球蛋白試驗偽陽性的原因，下列何者最不適當？
詳細解析
本題觀念：
直接抗人類球蛋白試驗（Direct Antiglobulin Test, DAT）用於檢測紅血球表面是否帶有體內結合的免疫球蛋白（IgG）或補體（如C3、C4）。DAT 對於診斷免疫性溶血性貧血、溶血性輸血不良反應、新生兒溶血病等具有關鍵意義，但也容易因為技術性或試劑性因素出現假陽性。
選項分析
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選項A 檢體含有自體冷型抗體
冷型自體抗體（IgM）在4°C–22°C容易與紅血球結合並活化補體，造成紅血球表面C3/C4附著，DAT 會呈假陽性。如不先消除自發凝集（spontaneous agglutination），可出現偽陽性現象(emedicine.medscape.com)。 -
選項B 採血試管中含有矽膠，引發補體活化
使用含矽膠的血清分離管（serum separator tube）時，矽膠可在洗滌步驟中刺激補體活化，使C3附著於紅血球，DAT 多呈假陽性，尤其以抗-C3試劑最易檢出(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。 -
選項C 測試的紅血球懸浮液過濃
DAT 核心在於先將紅血球洗淨後，再加入抗人球蛋白（AHG）試劑。文獻並未將「懸浮液過濃」列為DAT假陽性的已知原因。過濃懸浮可能影響沉降、清洗效率，但非典型或常見之假陽性因素，故最不妥當。 -
選項D 發生C4補體結合在測試的紅血球上
除了C3外，C4也可在體內（如寒冷刺激）或體外（如試管處理）固定於紅血球表面。若C4是「體外活化」所致，則屬偽陽性；若C4為病理性補體標誌，也會被DAT檢出。如冷鏈處理過程或試管離心後未立即加EDTA阻斷，可見C4偽結合(pubmed.ncbi.nlm.nih.gov)。
答案解析
選項A、B、D 都屬公認會造成DAT假陽性的因素：
- A 的IgM冷型抗體會自發凝集並活化補體；
- B 的矽膠會在試管中誘導補體活化；
- D 的C4補體若在體外途徑活化並附著於紅血球，也會被DAT檢出。
選項C「紅血球懸浮液過濃」並非典型假陽性來源，故為最不適當選項。
核心知識點
- DAT原理：抗人球蛋白（AHG）試劑（polyspecific或monospecific anti-IgG、anti-C3d/C3b）與帶IgG或補體之紅血球反應，形成可見凝集。
- DAT假陽性常見技術性因素：
- 過度離心、汙染試劑
- 洗滌不充分
- 離心後延遲加AHG或試管長時間保持懸浮
- DAT假陽性常見樣本/試劑因素：
- 冷型自體抗體（IgM）引發自發凝集、補體活化
- 矽膠或金屬離子誘發補體活化
- 高血漿IgG水準、類風濕因子干擾
- 血液樣本汙染（細菌、纖維蛋白）
- 補體組成：C4與C3均可被AHG檢出，需考量體外活化與體內附著之區別。
- 實驗室防範：
- 使用EDTA抗凝以抑制試管內補體活化
- 避免含矽膠分離管做DAT
- 標準化紅血球濃度與洗滌程序
- 及時執行AHG步驟
臨床重要性
DAT 是診斷溶血性貧血的重要工具，理解並排除假陽性來源可防止誤診或不必要的治療介入，如錯誤判斷為AIHA而給予免疫抑制。信賴正確的前處理與操作流程，並結合臨床及其他實驗室資料，才能正確詮釋DAT結果。