115年:(醫檢)病生理(1)
腦脊髓液中之隱球菌（cryptococcus）最常利用下列何種染色方法觀察其多醣體莢膜（polysaccharide capsule）？
AIndia ink stain
BSudan black stain
CMasson trichrome stain
DPrussian blue stain
詳細解析
本題觀念：
本題考查的是隱球菌（Cryptococcus）的經典形態學鑑定方法。隱球菌（特別是新型隱球菌 Cryptococcus neoformans）最顯著的致病因子與特徵是其厚實的多醣體莢膜（polysaccharide capsule）。在臨床懷疑隱球菌腦膜炎時，檢驗腦脊髓液（CSF）最傳統且快速的染色檢查即是針對此結構進行觀察。
選項分析
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A. India ink stain (印度墨染色法) - 正確答案
- 原理：這是一種負染色法（Negative stain）。印度墨水中的碳顆粒無法穿透隱球菌厚實的多醣體莢膜，也無法進入菌體內部。
- 結果：在顯微鏡下，墨水會形成黑色或深灰色的背景，而隱球菌的莢膜則會呈現出一圈明顯的透明光暈（Halo），包圍著內部的酵母菌細胞。這是快速診斷隱球菌腦膜炎的傳統方法。
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B. Sudan black stain (蘇丹黑染色法)
- 用途：主要用於染脂質（Lipids）。
- 臨床應用：
- 血液學：鑑別急性白血病。骨髓母細胞（Myeloblasts）和嗜中性球顆粒會呈陽性（黑色），而淋巴母細胞（Lymphoblasts）通常為陰性。用於區分急性骨髓性白血病（AML）與急性淋巴性白血病（ALL）。
- 糞便檢查：檢測糞便中的脂肪（Fecal fat），用於診斷脂肪吸收不良（Steatorrhea）。
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C. Masson trichrome stain (馬森三色染色法)
- 用途：這是一種組織病理學染色，用於區分**膠原纖維（Collagen fibers）**與肌肉纖維或細胞質。
- 臨床應用：常用於評估肝硬化、腎纖維化或腫瘤組織中的纖維化程度。膠原纖維通常被染成藍色或綠色，肌肉和細胞質染成紅色，細胞核染成黑褐色。不適用於腦脊髓液的微生物檢查。
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D. Prussian blue stain (普魯士藍染色法)
- 用途：主要用於偵測鐵離子（Ferric iron, Fe³⁺），特別是含鐵血黃素（Hemosiderin）。
- 臨床應用：
- 組織切片：診斷血鐵沉積症（Hemochromatosis）。
- 血液/骨髓塗片：評估體內鐵質儲存量，觀察鐵粒幼紅血球（Sideroblasts），或診斷鐵粒幼細胞性貧血（Sideroblastic anemia）。
答案解析
題目詢問的是觀察腦脊髓液中隱球菌的「多醣體莢膜」最常使用的染色法。
- 隱球菌的莢膜具有排斥墨水顆粒的特性，使得 India ink stain（選項 A）成為觀察此結構的黃金標準（形態學上）。
- 雖然目前臨床上**隱球菌抗原檢測（Cryptococcal Antigen, CrAg）**因敏感度與特異度更高，已逐漸取代印度墨染色成為首選篩檢工具，但以「染色方法觀察莢膜」而言，India ink 仍是標準答案。
核心知識點
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隱球菌 (Cryptococcus) 鑑定重點：
- 檢體：腦脊髓液 (CSF)、血清。
- 染色：India ink (印度墨) ➜ 負染色，觀察透明莢膜 (Capsule)。
- 快速篩檢：乳膠凝集試驗 (Latex Agglutination) 或 LFA 測 CrAg 抗原（敏感度 > India ink）。
- 培養特徵：在 Birdseed agar (鳥糞培養基) 上，因產生黑色素 (Melanin) 而形成棕黑色菌落（利用 Caffeic acid）。
- 生化：Urease test 陽性。
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常見特殊染色總結 (醫檢師國考常考)：
- Sudan Black B：脂質 (鑑別 AML vs ALL)。
- Prussian Blue：鐵 / Hemosiderin (Sideroblasts)。
- Masson Trichrome：膠原纖維 (Fibrosis)。
- PAS (Periodic Acid-Schiff)：醣類 (真菌細胞壁、基底膜、肝醣)。
- Acid-Fast Stain (抗酸性染色)：分枝桿菌 (結核菌)。