111年:(醫檢)血液(2)

有關流式細胞儀螢光補償 ( color compensation )之敘述,下列何者最適當?

A可用於調校檢體自發之干擾螢光
B若螢光之吸收光譜重疊,則不需執行光補償調整
C同時使用之螢光愈多,光補償的影響愈不顯著
D使用適當的濾鏡可以降低螢光光譜重疊訊號干擾

詳細解析

本題觀念:

本題聚焦於流式細胞儀(multicolor flow cytometry)中螢光染劑發射光譜之交疊(spillover)問題,以及透過「色彩補償(color compensation)」與「光學濾鏡(optical filters)」的搭配來消除或減少不同螢光通道間的訊號干擾。

選項分析

  • 選項A 「可用於調校檢體自發之干擾螢光」
    色彩補償主要用來修正不同螢光染劑的發射光譜交疊所造成的「spillover」,並非用於自發性螢光(autofluorescence)的校正。自發性螢光需另外透過未染色對照或自發性螢光補償策略(autofluorescence subtraction)來處理,故此選項錯誤。

  • 選項B 「若螢光之吸收光譜重疊,則不需執行光補償調整」
    影響流式細胞儀量測的關鍵在於螢光染劑的「發射(emission)」光譜重疊,而非「吸收(excitation)」光譜。若發射光譜重疊,才會有訊號由非專屬通道(bystander detector)偵測而造成spillover,必須執行補償;故此選項錯誤。

  • 選項C 「同時使用之螢光愈多,光補償的影響愈不顯著」
    實際上,螢光染劑數量越多,光譜交疊的機會增加,spillover現象更嚴重,補償矩陣(compensation matrix)計算也越複

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