111年:(醫檢)檢驗(1)

下列那個因素會影響到聚合酶連鎖反應產物的特異性( specificity )?

ADNA雙股分離( denaturation )的溫度
B引子( primer)延伸( Extension )的溫度
C引子的序列
D反應循環數

詳細解析

本題觀念:

PCR產物的特異性(specificity)指能否僅放大目標序列而不產生非目標片段,核心在於引子與模板之間的配對準確度。

選項分析

  • 選項A DNA雙股分離(denaturation)的溫度
    Denaturation溫度(約95°C)僅用於打開雙股DNA,影響解鏈效率,並不直接改變primer與模板之間的序列專一性。 (en.wikipedia.org)

  • 選項B 引子(primer)延伸(Extension)的溫度
    Extension溫度(約72°C)主要為DNA聚合酶最佳催化條件,影響延伸速率與產量,primer配對已在annealing階段完成,故非決定特異性的關鍵因素。 (en.wikipedia.org)

  • 選項C 引子的序列
    Primer的長度、GC含量、序列互補性與二級結構風險直接決定其能否專一性地與目標序列結合,錯誤設計易造成非特異性放大。 ([aatb

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