有關一階段凝血檢驗方法（ one-stage clotting method ）檢驗嚴重型 A型血友病人凝血因子活性的標準作業程序，下列敘述何者最適當？

本題觀念：

本題考點為**一階段凝血因子活性檢測（One-stage clotting assay）的標準作業程序（SOP），特別是關於校正檢量線（Calibration curve）的建立與病人檢體稀釋（Patient sample dilution）**的品管要求。核心概念是「平行性（Parallelism）」驗證。

選項分析

• A. 標準參考曲線使用 3點（含）以上濃度執行校正時，病人檢體無須以不同稀釋倍數檢測

  • 錯誤。雖然使用 3 點以上校正可以建立準確的標準曲線（Standard Curve），但这僅驗證了試劑與儀器的線性關係。病人檢體仍需進行不同倍數稀釋（如 1:10, 1:20），以驗證平行性（Parallelism）。若病人檢體中含有干擾物質（如凝血因子抑制劑 Factor VIII Inhibitor 或 Lupus Anticoagulant），不同稀釋倍數推算出的活性結果會不一致（不平行）。因此，單一稀釋倍數無法排除干擾，不符合標準程序。

• B. 標準參考曲線使用單點濃度執行校正時，病人檢體只須以2個不同稀釋倍數檢測

  • 錯誤。單點校正（Single-point calibration）通常假設標準曲線通過原點且斜率固定，這在凝血因子檢測中極不準確，容易造成誤差。標準作法必須建立多點校正曲線（至少 3 點，通常為 3-5 點）來確保檢測範圍內的線性關係。

• C. 標準參考曲線使用 3點（含）以上濃度執行校正時，病人檢體應至少以2個不同稀釋倍數檢測

  • 正確。這是符合 CLSI H48 等國際檢驗指引的標準作法：
    1. 校正曲線：必須使用多個濃度點（至少 3 點）來繪製標準曲線，以確保在檢測範圍內的準確性與線性。
    2. 病人檢體：必須至少測試 2 個不同稀釋倍數（例如 1:10 與 1:20，或對於嚴重型患者使用較低稀釋倍數如 1:2, 1:5）。
    3. 目的：比較不同稀釋倍數所得的結果是否一致（Parallelism）。如果兩個稀釋倍數換算回來的活性差異過大（Non-parallelism），提示可能存在**抑制劑（Inhibitor）**或檢體品質問題，需進一步確認（如進行 Bethesda Assay）。這對於嚴重型 A 型血友病患者尤為重要，因為需區分是單純缺乏還是合併抑制劑。

• D. 標準參考曲線使用單點濃度執行校正時，病人檢體無須以不同稀釋倍數檢測

  • 錯誤。這是最不嚴謹的作法，既無可靠的校正曲線，又無平行性驗證，無法提供可信的臨床報告。

答案解析

正確答案為 (C)。 根據臨床檢驗標準（如 CLSI H48 指引），執行凝血因子活性分析時，必須建立**多點校正曲線（至少 3 點）以確保線性範圍涵蓋高低濃度；同時，病人檢體必須進行多倍數稀釋（至少 2 個稀釋度）**測試。透過檢查不同稀釋度的結果是否呈現「平行性」，可以排除非特異性干擾或特定抑制劑的存在，確保發出的報告準確可靠。

核心知識點

考生應掌握以下凝血因子檢測重點：

1. 檢測原理：一階段法（One-stage assay）是基於 APTT（內源性因子 VIII, IX, XI, XII）或 PT（外源性因子 II, V, VII, X）的修正試驗。
2. 平行性（Parallelism）：是因子檢測最重要的品管指標。若病人檢體含有抑制劑（Inhibitor），隨著稀釋倍數增加，抑制劑被稀釋，測得的因子活性會呈現假性上升的現象（不再與標準曲線平行）。
3. 嚴重型血友病：定義為因子活性 < 1% (< 0.01 IU/mL)。檢測此類檢體時，雖活性極低，仍需遵循多稀釋倍數原則確認結果的可靠性，或改用低濃度標準曲線/高敏感度試劑。

參考資料

1. CLSI H48-A: Determination of Coagulation Factor Activities Using the One-Stage Clotting Assay. (Clinical and Laboratory Standards Institute 指引，強調多點校正與多倍數稀釋的重要性)
2. Practical Haemostasis: 1-Stage APTT-based Factor Assays. (https://practical-haemostasis.com/Factor%20Assays/1_stage_assay_aptt.html)
3. WFH (World Federation of Hemophilia): Diagnosis of Hemophilia and Other Bleeding Disorders - A Laboratory Manual. (強調 Parallelism 的檢查)